Sievers Eclipse细菌内毒素检测仪与96孔板检测的比较：检测时间和结果

简介

细菌内毒素检测（BET，Bacterial Endotoxins Testing）是测量水样品、原材料、肠道外药物中细菌内毒素污染的必要测定程序。全 球药典协调统一对细菌内毒素检测有规范性专论，概述了3种常用的方法（即凝胶法、动态浊度法、动态显色法）。显色法分为终点法和动态法这两种形式。在此项研究中，我们同时使用96孔板和Sievers® Eclipse细菌内毒素检测仪这两种动态显色法平台，并比较了它们的检测时间和结果。

配备孵育吸光度读数器的96孔板是蕞常用的符合药典的动态显色检测平台。传统的96孔板虽然是众所周知的可靠的细菌内毒素检测平台，却有诸多无法克服的缺点，比如过长的设置时间、重复的移液步骤、代价高昂的出错几率。Sievers® Eclipse是一款符合药典的微孔板读数器，带有设计独特的微流体微孔板，预载了内毒素标准品和阳性对照标准品（PPC，Positive Product Control），在无需采用机器人技术的情况下实现了内毒素测定的自动化，并且避免了大部分潜在的操作错误。

操作程序

同时用Sievers Eclipse和96孔板来检测常规水和常规产品，记录以下操作的时间：

1. 准备标准品和样品

2. 设置软件

3. 将标准品和样品添加到微孔板

4. 添加阳性对照标准品（PPC）

5. 添加鲎试剂

6. 测定前的准备时间总计

我们得到了测定结果，并比较了以下参数：阴性对照标准品、R值、标准品的%CV、PPC回收率、PPC的%CV。

*CV：Coefficients of Variation，变异系数

此项研究由一位合格的分析员来完成，每种方法的10次测定所花的准备时间一致。分析员同时使用完整的96孔板和Eclipse微孔板，每次测定时共测量21份样品。在每种方法的10次测定中，5次使用产品，另5次仅使用水样品。完成此项研究的分析员拥有丰富的移液操作经验和10年的鲎试剂测试经验。

检测结果

表1：Sievers Eclipse平台和96孔板的检测时间比较

表2：Sievers Eclipse平台和96孔板的10次测定结果比较

*所有的值均包括常规水和常规产品检测结果

与96孔板相比，Sievers Eclipse每次测定的平均时间缩短了27-39分钟。平均设置时间因分析员和所运行的具体检测而异。产品检测往往需要进行多次稀释，因此分析员需要较长时间来准备。但水样品检测可以简化，需要的准备时间较短。此项研究结果表明，假设分析员每天进行2次常规测定，Sievers Eclipse平台可使该分析员每年节省约260小时或6.5周的工作时间（假设分析师一年工作48周，一周工作40小时）。分析员每年节省近14%的时间，可以将省下来的时间用于实验室和本部门的其它工作。

此外，现今普遍使用的96孔板要求进行繁琐的移液步骤。假设分析员检测21份样品（即能用96孔板检测的蕞多样品数），如果使用连续移液器（Repeater Pipette），则大约需要进行242个移液步骤。如果使用多道移液器（Multi-channel Pipettor）和试剂槽来存放鲎试剂，虽能减少移液步骤，但操作时间仍然太长，而且技术上容易出错。在同样情况下如果用Sievers Eclipse来检测21份样品，则仅需进行27个移液步骤，而且设置时间和得到结果的时间都大大缩短（见下面的图1和图2）。

Eclipse还可以非常便捷地设置常规检测和各种研究，其中包括但不限于：

• 低浓度内毒素回收率（LER，Low Endotoxin Recovery）研究

• 样品保存时间研究

• 抑 制/增强筛选研究

• 产品验证

• 灭菌箱验证

检测21份样品时的效率比较

图1：Sievers Eclipse和96孔板的连续移液器操作比较

图2：Sievers Eclipse和96孔板的多道移液器操作比较

表1和表2中的结果显示，Sievers Eclipse可以产生与96孔板相当的结果，但Eclipse的手动操作时间大大缩短。Eclipse还满足表3中所列的全部药典要求。

表3：药典要求

结论

Sievers Eclipse是一款完全合规的内毒素检测平台，满足USP <85>、EP 2.6.14、ChP <1143>、JP 4.01规定的药典要求。Sievers Eclipse采用先进的工具和技术（例如Sievers Eclipse微孔板采用先进的微流体技术），使质量控制实验室不但大大节省了分析员的操作时间，还减少了潜在的无效检测几率，以及重新检测和撰写调查报告所耗费的时间。