法规概述：USP <85>“细菌内毒素检测”

在生产注射用药物或医疗器械的过程中遵守污染控制相关监管标准是确保患者安全的基本步骤。本文将详细介绍美国药典（USP）第<85>章——“细菌内毒素检测”（Bacterial Endotoxins Testing，BET）。

内毒素是来源于革兰氏阴性菌外细胞膜的生物污染物。它们虽然不是活的有机体，却是高度危险的致热源，一旦绕过人体正常的消化道防御机制进入体内，就会引起发热反应。此外，在某些情况下，内毒素还会导致血压急剧下降、器官衰竭、感染性休克，甚至死亡。

由于内毒素即使在经过标准消毒和灭菌流程后仍会继续存在，因此对于会接触到血液或脊髓液的产品和给药装置而言，严格的检测绝对至关重要。

除了USP <85>中概述使用LAL对内毒素进行检测或定量测定的方法的药典要求外，本章还概述了可能通过产生不一致或不准确结果而影响结果的各种因素。虽然其中没有详细说明如何管理或缓解这些因素，但强调了在验证中进行充分的方法开发的重要性。如需了解如何解读和应用USP <85>中的要求，请参见USP <1085>“内毒素检测指导原则”。

方法适用性是在将特定的细菌内毒素检测方法用于常规检测之前的一个验证过程，旨在确认该方法对于特定的产品或应用是合适且可靠的。

内毒素检测具有较高的灵敏度。方法开发和适用性评估通常是针对特定产品的，旨在证明某药品、器械或原材料不会干扰反应及其检测方法，以确保获得有效的结果。适当的方法适用性评估可确保细菌内毒素检测结果可靠、有效且符合法规要求。

药品的安全性阈值并非“一刀切”。在确定验收标准时，剂量、使用时间和给药途径等因素都会考虑在内。

制造商必须根据每种产品的人体给药途径来计算其内毒素限值 （EL）。使用的公式如下：

EL = K / M

在这个等式中，K代表身体的耐受极限（“安全阈值”），而M则代表“最坏情况”——患者每公斤体重每小时可以接受的最大药物剂量。

K因子会因给药途径的不同而发生巨大变化。例如，静脉注射（IV，Intravenous）或肌肉注射（IM，Intramuscular）产品被定义为进入血液或肌肉的药物。IV和IM产品的耐受极限较高，这是因为其给药方式所带来的风险较低。相比之下，直接注射到脊髓或大脑中的药物，即所谓的鞘内（IT）发生不良反应的风险较高，因而通常具有较低的耐受极限。这意味着脊髓用药的内毒素负荷必须低于标准静脉滴注制剂。

此外，还有一些额外的计算考虑了药物是单次给药还是连续滴注，因为给药速率会改变风险特征。这些计算将患者体重或患者类型等因素考虑在内。基于体重的数学计算也是儿童用药和兽药的EL通常明显更低的原因，因为体型较小的患者对内毒素暴露的耐受阈值较低。

这将是下述最大有效稀释度（MVD，Maximum Valid Dilution）计算的一部分。

最大有效稀释度（MVD）是可以确定内毒素限值的样品最大允许稀释倍数。它同时考虑了内毒素限值计算和鲎试剂灵敏度，但提供了稀释因子以避免干扰。

MVD =（内毒素限值 （EL） ×样品溶液浓度）/（λ）

λ是鲎试剂的标示灵敏度或标准曲线中使用的最低浓度。

该计算考虑到了样品中可能含有抑制内毒素检测（导致假阴性结果）或增强内毒素检测（导致假阳性结果）的物质。

样品制备过程中如果引入了植物材料或真菌（例如使用带滤芯的移液器吸头），则可能带入β-葡聚糖。

β-葡聚糖是由葡萄糖分子通过β-糖苷键连接而成的复合碳水化合物，也被称为多糖。β-葡聚糖天然存在于无数生物体中，包括酵母、真菌、细菌、藻类，以及燕麦和大麦等谷物。其中真菌和酵母的β-葡聚糖含量最高，同时又是普遍存在的微生物，这意味着污染的风险相当大。

β-葡聚糖会干扰结果，通过与内毒素不同的途径激活鲎试剂而导致假阳性结果。

传统的检测方法（尤其是凝胶法）的操作和终点判定均依赖人工。在这些检测方法中，凝胶的形成需要通过目视检查试管来确认。这种手动操作模式不仅耗时，而且结果的判读存在主观性，容易引入人为误差。这可能会损害数据可靠性。

为了降低这些风险，各实验室正在转向定量数据检测。这些平台使用合规软件进行多次读数，并提供安全的数据传输、针对特定检测的完整审计跟踪，同时严格遵守21 CFR Part 11和ALCOA+数据可靠性合规要求。此外，这些平台还提供一系列自动化选项，包括样品稀释和移液操作。

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